漢坦病毒IgM 捕捉ELISA 法（MacELISA） 實(shí)驗(yàn)
發(fā)布時(shí)間：2014-3-8 9:44:12??????瀏覽次數(shù)：
IgM 捕捉ELISA 法（MacELISA）檢測出血熱IgM 抗體
抗原標(biāo)記物，用以檢測出血熱特異性IgM 抗體。具有較高的敏感性、特異性和重
復(fù)性。特別適用于出血熱的早期特異性診斷及其它實(shí)驗(yàn)性研究。本試劑盒為96
人份/包裝。
試驗(yàn)材料：
（1）抗人IgM 抗體（μ 鏈）：用pH9.5 的包被液包被酶標(biāo)板
（2）凍干陽性血清/凍干陰性血清1 支， 0.2ml/支，工作濃度為1：10；
（3）凍干辣根過氧化物酶－病毒抗原標(biāo)記物1 支， 0.5ml/支，工作濃度為
1：20；
（4）凍干小牛血清1 支，1ml/支；
（5）濃縮洗液（10 倍濃縮）1 瓶，50ml；（標(biāo)本稀釋液為含5%小牛血清原倍
洗液）；
（6）A/B 顯色液和終止液各1 瓶。
（凍干試劑先用相應(yīng)量的去離子水溶解，然后臨用前根據(jù)所需按工作濃度稀
釋使用，余下的放-20℃保存）
（7）終止液：4N H2SO4
（8）酶標(biāo)儀。
檢測步驟：
（1）將待檢血清用稀釋液100 倍稀釋，加入已包被抗人μ 鏈抗體的酶標(biāo)板
一孔中，100μl/孔，同時(shí)加入已1：10 稀釋的陽性血清/陰性血清對照各一孔，
100μl/孔，置37℃水浴孵育1 小時(shí)。
（2）棄去血清，用PBS－T 漂洗5 遍，甩干。
（3）將凍干辣根過氧化物酶－病毒抗原標(biāo)記物1：10 稀釋后，加入反應(yīng)板
相應(yīng)孔內(nèi)，100μl/孔，37℃水浴孵育1 小時(shí)。
（4）棄去酶標(biāo)抗體，用洗滌液洗滌6 次，甩干。
（5）加顯色液:于各反應(yīng)孔內(nèi)加A/B 液各一滴，37℃，避光3～5 分鐘。
（6）加終止液（4NH2SO4）于每反應(yīng)孔，一滴/孔。
結(jié)果判斷：
（1）目測方法：
陽性對照孔呈明顯藍(lán)色，陰性對照孔呈無色，對照成立；若待檢血清孔呈明
顯淡藍(lán)色或深藍(lán)色（TMB），則標(biāo)本為出血熱IgM 抗體陽性，反之陰性。
（2）酶聯(lián)免疫檢測儀檢測：
于450nm（TMB）陽性對照孔OD 值/陰性對照孔OD 值,即P/N≥2.1，對照成
立；若待檢血清孔OD 值與陰性對照孔OD 比值≥2.1，則標(biāo)本為流行性出血熱IgM
抗體陽性，反之陰性。
（陰性對照孔OD 值小于0.05 按0.05 記，若大于0.05 按實(shí)際數(shù)值計(jì)算）
意義：
陽性結(jié)果，表明患者新近漢坦病毒感染，用于出血熱早期診斷。
陽性對照孔呈明顯藍(lán)色，陰性對照孔呈無色，對照成立；若待檢血清孔呈明
顯淡藍(lán)色或深藍(lán)色（TMB），則標(biāo)本為出血熱IgM 抗體陽性，反之陰性。
（2）酶聯(lián)免疫檢測儀檢測：
于450nm（TMB）陽性對照孔OD 值/陰性對照孔OD 值,即P/N≥2.1，對照成
立；若待檢血清孔OD 值與陰性對照孔OD 比值≥2.1，則標(biāo)本為流行性出血熱IgM
抗體陽性，反之陰性。
（陰性對照孔OD 值小于0.05 按0.05 記，若大于0.05 按實(shí)際數(shù)值計(jì)算）
意義：
陽性結(jié)果，表明患者新近漢坦病毒感染，用于出血熱早期診斷。
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