登革熱IgG酶聯(lián)（ELISA）免疫吸附試驗
發(fā)布時間：2014-3-8 9:14:19??????瀏覽次數(shù)：
酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測單份和/或雙份血清IgG 抗體
試驗材料：
（1）抗原：
陽性抗原：采用C6/36 細胞感染登革病毒培養(yǎng)物為陽性抗原。
陰性抗原：未接種病毒的正常C6/36 細胞為陰性抗原對照。
（2）辣根過氧化物酶標記的抗人IgG 抗體；
（3）緩沖液：
包被液：pH9. 6 碳酸緩沖液；
稀釋液：pH7.4 PBS（含5%脫脂奶）
洗滌液：pH7.4 PBS－T（0.05％吐溫－20）；
（4）顯色液：A/B 液
（5）終止液：4N H2SO4
（6）酶標板、酶標儀。
檢測步驟：
（1）用包被液按工作濃度稀釋抗原，100μl/孔，4℃過夜；
（2）棄去包被液，用PBS-T 重復(fù)洗滌3～5 次，甩干；
（3）將待檢血清用稀釋液從1：100 開始作2 或4 倍連續(xù)稀釋，加入抗原孔，
100μl/孔，同時設(shè)陰、陽性對照，37℃水浴1 小時；
（4）棄去血清，用洗滌液洗滌5～6 次；
（5）加酶結(jié)合物，用稀釋液按工作濃度稀釋，100μl/孔，37℃水浴1 小時；
（6）棄去酶標抗體，用洗滌液洗滌6 次，甩干；
（7）加顯色液：于各反應(yīng)孔內(nèi)加A/B 液各一滴，37℃，避光3～5 分鐘；
（8）加終止液于每反應(yīng)孔，100μl /孔。
結(jié)果判斷：
于450nm（TMB）陽性對照孔OD 值/陰性對照孔OD 值，即P/N≥2.1，對照成
立；若待檢血清孔OD 值與陰性對照孔OD 比值≥2.1，則標本為登革熱IgG 抗體
陽性，反之陰性。（陰性對照孔OD 值小于0.05 按0.05 記，若大于0.05 按實際
數(shù)值計算）
122
意義：
陽性結(jié)果，表明曾受到DV 感染，>1：100 有診斷參考意義；
恢復(fù)期血清抗體滴度比急性期抗體滴度有4 倍或4 倍以上升高則可確診。
試驗材料：
（1）抗原：
陽性抗原：采用C6/36 細胞感染登革病毒培養(yǎng)物為陽性抗原。
陰性抗原：未接種病毒的正常C6/36 細胞為陰性抗原對照。
（2）辣根過氧化物酶標記的抗人IgG 抗體；
（3）緩沖液：
包被液：pH9. 6 碳酸緩沖液；
稀釋液：pH7.4 PBS（含5%脫脂奶）
洗滌液：pH7.4 PBS－T（0.05％吐溫－20）；
（4）顯色液：A/B 液
（5）終止液：4N H2SO4
（6）酶標板、酶標儀。
檢測步驟：
（1）用包被液按工作濃度稀釋抗原，100μl/孔，4℃過夜；
（2）棄去包被液，用PBS-T 重復(fù)洗滌3～5 次，甩干；
（3）將待檢血清用稀釋液從1：100 開始作2 或4 倍連續(xù)稀釋，加入抗原孔，
100μl/孔，同時設(shè)陰、陽性對照，37℃水浴1 小時；
（4）棄去血清，用洗滌液洗滌5～6 次；
（5）加酶結(jié)合物，用稀釋液按工作濃度稀釋，100μl/孔，37℃水浴1 小時；
（6）棄去酶標抗體，用洗滌液洗滌6 次，甩干；
（7）加顯色液：于各反應(yīng)孔內(nèi)加A/B 液各一滴，37℃，避光3～5 分鐘；
（8）加終止液于每反應(yīng)孔，100μl /孔。
結(jié)果判斷：
于450nm（TMB）陽性對照孔OD 值/陰性對照孔OD 值，即P/N≥2.1，對照成
立；若待檢血清孔OD 值與陰性對照孔OD 比值≥2.1，則標本為登革熱IgG 抗體
陽性，反之陰性。（陰性對照孔OD 值小于0.05 按0.05 記，若大于0.05 按實際
數(shù)值計算）
122
意義：
陽性結(jié)果，表明曾受到DV 感染，>1：100 有診斷參考意義；
恢復(fù)期血清抗體滴度比急性期抗體滴度有4 倍或4 倍以上升高則可確診。
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